Анализ пцр на гепатит с

Специальное лабораторное исследование — анализ пцр на гепатит с — значительно упрощает диагностику этого вирусного заболевания. Исключением не является и гепатит С. Небольшая по объему проба крови может быть проверена на содержание рнк и другой генетический материал вирусного агента. Анализу с проведением пцр подвергаются все лица с циркулирующими в плазме крови антитела к гепатиту С, наличие которых подтвердило качественное обнаружение.

Расшифровка результатов интерпретируется в графе бланка исследования как «положительный» или «отрицательный» анализ. Кроме этого, с помощью пцр возможно не только качественно определить минимальное содержание вируса, но и подсчитать число частиц. Таким образом, можно определить предполагаемую вирусную нагрузку и максимально точно определиться с врачебной тактикой лечения.

Вирусное поражение печени

Печень как элемент пищеварительного тракта принимает на себя огромную нагрузку. В ее клетках происходит большинство метаболических реакций всех видов обмена, что обеспечивает оптимальное функционирование всех органов и систем. В тоже время велико ее детоксикационное значение для выведения шлаков и продуктов обмена с ферментативной желчью.

Поражение печени вирусами различной природы чрезвычайно опасно для органа. Разнообразная клиническая картина и неподатливость лечению выводит гепатиты на первое место по опасности для здоровья. Гепатит С носит хронический характер и долгое время может давать отрицательный результат тестирования, медленно паразитируя в организме человека. Передается вирус через биологические жидкости: кровь и реже через сперму. Наркотическое злоупотребление нестерильными шприцами, естественное родоразрешение зараженных женщин, случайные травмы или порезы медработников могут повлечь передачу вируса здоровым людям.

Своевременная диагностика заболевания затрудняется скрытой клинической картиной и бессистемностью патологии. Положительный результат может быть просто упущен некачественным выполнением анализов. Только значительное поражение клеток печени вызывает определенную симптоматику, однако, отрицательный эффект виремии к тому времени не оставляет шансов восстановить орган.

Современная медицина разработала специальные методы распознавания малейших следов вируса. Пцр, ифа, биопсия печени позволяют распознать малейшее повреждение печени и минимальный уровень антител против вируса. Анализ cпомощью пцр наиболее прост и достоверен в диагностической практике.

Качественный анализ

Суть полимеразной реакции заключается в наработке последовательности рнк. Реакция выполняется при наличии в плазме крови таких же вирусных белков.

Специальные катализаторы позволяют синтезировать сходную вирусной последовательности цепь, которую сравнивают с известными нуклеотидами вирусной рнк. На основе этого и определяют вирусную нагрузку и поражение печени.

Пцр способна уловить даже единичное присутствие искомого гена во взятой крови. Такая диагностическая цепная реакция также весьма специфична. Последовательность нуклеотидных цепей уникальна для каждого существа, так что ферментативные праймеры создают идентичные последовательности искомой генетической информации. Таким образом, можно с малейшей точностью выявить любой вирус, даже если его количественный показатель чрезвычайно мал.

Пациентам, в крови которых были обнаружены выработанные антитела против вирусного гепатита, проводят качественное исследование пцр или ифа. Результат анализа может быть как положительный, так и отрицательный, что в обоих случаях требует лечения.

Расшифровать положительный ответ цепной реакции следует как наличие фрагментов рнк гепатитного вируса или как явление инфицирования.

В плазме крови в данный момент вирус активно размножается и паразитирует над клетками печени. Пцр-диагностика может дать отрицательный ответ в случае, если частиц вирусной рнк присутствует в плазме мало, ниже уровня чувствительности теста или их вовсе нет. После непосредственного заражения количество вируса нарастает сравнительно медленно, и только спустя 1–2 недели ифа или другое качественное исследование способны их выделить.

Отрицательный анализ можно получить и в следующих случаях:

1. При взятии материала в ненадлежащих условиях, получении пробы крови с загрязнениями;
2. При ранее произведённых пациенту инъекциях гепарина.
3. При присутствии во взятых образцах других ферментов и субстратов, нарушающих ход цепной реакции.

Количественный анализ

Количественный тест как микробиологическая диагностика призван определять вирусную нагрузку. Подтвержденный качественный анализ на виремию служит основанием для определения количества генетического материала и его концентрации. Число выявленных вирусных рнк определяют в единице объема крови, обычно в 1 миллилитре. Искомые материалы выражают в международных единицах, некоторые лаборатории в анализах ифа используют количество копий.

Обычно до проведения любой терапевтической схемы проводится количественный анализ пцр. Подсчет вирусных рнк проводят достаточно часто: спустя одну, четыре, двенадцать и двадцать четыре недели. 12-ая неделя считается показательной, так как на основе анализа в этот период проводится расшифровка эффективности лечебных мероприятий.

Количественный анализ с помощью пцр или ифа предполагает взятие проб из вены.

Интерпретация результатов как высокая вирусная нагрузка начинается от цифры в 800000 МЕ/мл. Такой положительный результат на гепатит С отражает наличие не менее 3000000 копий в одном миллилитре крови. Низкий уровень виремии останавливается на цифре в 400000 МЕ/мл. Результатами исследования могут быть значения как отрицательный ответ, а также показатель «ниже измерительного диапазона».

Количественный тест с оценкой «ниже диапазона измерений» говорит, что в ходе реакции не удалось произвести подсчет рнк. Вирус же в организме все же циркулирует, на что указывает положительный качественный тест. Отрицательный показатель количественного анализа пцр или ифа свидетельствует об отсутствии рнк в данной пробе крови.

Несмотря на ограниченные способы передачи вируса через кровь, повышается риск передачи вируса через секреты половых желез, от матери к ребенку.

Количественный анализ оказывает существенную помощь в оценке терапевтических мероприятий. Ифа и пцр отражают действие противовирусных лекарственных средств, помогают установить сроки терапии и оценить формирование иммунитета больных. Скорый отрицательный ответ лабораторных тестов свидетельствует об успешном лечении и необходимости сократить сроки терапии. Медленное снижение показателей виремии можно расшифровать как необходимость видоизменения терапевтического курса. Уровень вирусной нагрузки определяет и прогноз заболевания. Гепатит с низким данным показателем, скорее всего, будет просто лечить и можно полностью вывести вирус из организма. Высокие показатели вирусного присутствия в крови требует внимательного отношения и разностороннего лечения.

Рекомендуем прочитать:

Анализ ПЦР на гепатит – что это и зачем делают?

Почему необходим анализ ПЦР при подозрении на гепатит С, что это такое?

Вирус гепатита С – РНК содержащий вирус, имеет 6 генотипов и до 500 субтипов. Из всех гепатитов этот вирус обладает самой высокой мутационной способностью и преодолевает защитный барьер иммунной системы. Из общего числа заболевших гепатитами, вирус С стал причиной 70% случаев хронической формы и 30% цирроза и рака печени.

Суть способа: часть исследуемого гена с помощью специальных ферментов и условий заставляют размножаться в пробирке. Анализ ПЦР позволяет определить штамм вируса, без которого невозможно провести результативное лечение: каждый генотип по-разному чувствителен к антивирусным препаратам. Применяется два типа ПЦР:

• качественный;
• количественный.

Противовирусная терапия нуждается в постоянном контроле, чтобы своевременно скорректировать лечение, для этих целей также используется полимеразная цепная реакция.

Качественный и количественный ПЦР

ПЦР качественный на гепатит С дает ответ: есть ли в крови пациента штамм вируса С и какой именно. Генотипирование необходимо для уточнения диагноза, прогноза заболевания и определения сроков лечения.

По принятой классификации ген обозначается числом, а подтип маленькой латинской буквой.

Расшифровка таблицы генотипов вируса С:

• Генотип 1а, 1b, 1с
• Генотип 2а, 2b, 2с, 2 d
• Генотип 3а, 3b, 3с, 3d, 3e, 3f
• Генотип 4а, 4b, 4с, 4d, 4e, 4f, 4g, 4 h, 4 i, 4 j
• Генотип 5 а
• Генотип 6 а

Самые распространенные генотипы 1,2,3. В России чаще всего встречаются 1а, 1b, 2 и 3 штаммы вируса С.

Генотип вируса 1b труднее других поддается лечению, в 90% переходит в хроническую форму, из которых 30% перерождаются в рак или цирроз печени.

Генотипы 2а и 3а имеют степень хронизации 33-50 %, более отзывчивы на противовирусную терапию.

При подтверждении присутствия вируса проводится ПЦР количественный на гепатит С, с помощью которого рассчитывают количество молекул РНК, находящихся в лабораторном образце больного.

Расшифровка анализа

Качественный ПЦР анализ имеет два ответа:

• отрицательный;
• положительный.

ПЦР отрицательный означает, что возбудитель в образцах крови не обнаружен.
Положительный ответ свидетельствует об обратном: обнаружены РНК того или иного генотипа вируса С.

Вероятность достоверности результата равна 95%. Остальные 5% — это ошибка по вине человека. Такая возможность допускается из-за высоких требований к проведению исследования:

• правил хранения реактивов;
• соответствующей квалификации медперсонала;
• чистоты биоматериала.

Сам набор ПЦР имеет 100% диагностическую точность.

Количественный ПЦР РНК гепатита С позволяет определить вирусную нагрузку на организм больного. С его помощью:

• уточняется стадия заболевания (острая, хроническая);
• определяется эффективность противовирусного лечения;
• выясняется необходимость биопсии печени.

В некоторых случаях больной не ощущает никаких признаков болезни, в то время как методом ПЦР установлено инфицирование ВГС. Это означает, что заболевание находится на ранней стадии развития либо в хронической форме. Для уточнения диагноза необходимы дополнительные исследования, для скорейшего начала противовирусного лечения.

Вирусная нагрузка при гепатите С

Вирусная нагрузка показывает активность печеночного вируса, насколько активно происходит его размножение.

Что это?

ПЦР количественный гепатита С измеряется в Международных Единицах на 1 мл или МЕ/мл, что означает, сколько в 1 мл исследуемой крови обнаружено копий рибонуклеиновой кислоты определенного штамма вируса С.

Какая считается высокой, какая низкой?

Анализ на вирусную нагрузку позволяет определить наличие вирусных РНК в концентрации 50 МЕ/мл. Вирусная нагрузка в норме – это когда ПЦР не обнаружено ни одной молекулы РНК ВГС.

Таблица вирусной нагрузки:

• низкая – концентрация от 600 МЕ/мл 3*104 МЕ/мл;
• средняя – концентрация от 3*104 МЕ/мл до 8*105МЕмл;
• высокая – уровень более 8*105 МЕ/мл.

Низкая вирусная нагрузка – это сигнал, что терапевтическое лечение подобрано правильно, и прогноз на излечение от гепатита С – благоприятный.

Высокая концентрация вирусных клеток свидетельствует, что болезнь находится в острой фазе. Кровь пациента является опасным источником инфекции.

Вирусная нагрузка, показатели которой находятся на среднем уровне, характеризует либо хроническую стадию ГВС, либо может иметь два тренда развития: к ее повышению или понижению.

По ее окончании – через 6 месяцев делается контрольная ПЦР.

Стоимость ПЦР диагностики

Поводом для беспокойства должны стать следующие симптомы:

• общая слабость;
• изменение цвета кожи, глазных склер, выделений;
• тошнота;
• снижение аппетита;
• боли в мышцах и суставах;
• тяжесть в правом подреберье;
• повышенный уровень в крови АСТ и АЛТ.

При контакте с инфицированными больными, в предоперационный период, при гемодиализе также рекомендовано обследование.

Государственные клиники делают анализ крови на ПЦР бесплатно, если имеется направление от инфекциониста или гепатолога.

Платные услуги по ПЦР диагностике оказывают во всех крупных российских городах. Стоимость зависит от типа теста, имеющегося оборудования, сроков проведения и других факторов.

Качественный ПЦР анализ в Москве и С-Петербурге обойдется от 600 до 900 руб. В регионах – от 300 до 800 руб.

Определение вирусной нагрузки гепатита С будет стоить 17000-22000 руб. Для прочих видов инфекции цена количественного исследования: 1200-10000 руб.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

В чем преимущества метода полимеразной цепной реакции перед другими диагностическими способами?

1. Широкий спектр применения. С помощью ПЦР, используя типовое оборудование, можно определить любой вирус.
2. Точность определения возбудителя. Применяя различные комбинации ферментов и технику проведения анализа, достигается 100% спецификация исследования для обозначенной инфекции.
3. Высокая чувствительность. Методика позволяет выявить присутствие в крови одной молекулы вируса.
4. Оперативность. Качественный анализ бывает готов через несколько часов, количественный – через двое суток.
5. Диагностика вируса в инкубационном периоде. При ПЦР возбудитель определяется не по наличию антител, когда уже имеется иммунная реакция организма, а до начала патологического процесса, что облегчает лечение.

Недостатки ПЦР являются следствием ее достоинств:

• для чистоты анализа требуется высочайшая степень чистоты, в том числе воздуха в лаборатории, чтобы «чужие» ДНК не попали в исследуемый образец;
• высокие требования к персоналу, осуществляющему забор и анализ биоматериала.

Преимущества ПЦР

Лабораторное исследование методом ПЦР позволяет получить даже больше информации, чем просто присутствие РНК вируса. Определяя параметр уровня радиоактивного излучения, есть возможность выявить, какое количество генетического материала содержалось изначально в исследуемом образце. В случае гепатита – определить показатель уровня вирусной нагрузки.

Еще одним достоинством этого метода является очень высокая степень чувствительности реакции ЦР. Она гораздо выше, чем у классических методов выявления вирусов. В идеальном варианте, для того чтобы выявить искомый ген, для ПЦР достаточно всего одного вируса в пробе.

Кроме этого, ПЦР полностью специфична. Ее праймеры создаются таким образом, чтобы они полностью соответствовали уникальным участкам искомых генов, которых нет ни у какой другой последовательности. Как уникальны отпечатки пальцев, так и в каждом гене есть уникальные последовательности из нуклеотидов.

Качественный анализ ПЦР

Качественный анализ позволяет выявить только факт наличия вируса в крови. Этот тест нужно проводить для всех пациентов, у которых были обнаружены в крови антитела к гепатиту С. Его результатом может быть лишь одно значение из двух: «обнаружено» либо «не обнаружено». У здорового человека в норме (референсное значение) должно быть «не обнаружено».

Есть и специальная интерпретация таких результатов проведенного качественного исследования:

• Результат «обнаружено». Это означает, что в анализируемом образце взятого биологического материала был найден фрагмент РНК, который специфичен для вируса гепатита С. Следовательно, есть факт инфицирования пациента вирусом гепатита С. Если результатом качественного ПЦР является «обнаружено», то это свидетельствует о том, что вирус размножается и в это время инфицирует в организме новые клетки печени.
• Результат «не обнаружено». Такой вердикт говорит о том, что в анализируемом образце полученного биологического материала в данной лаборатории не обнаружен фрагмент РНК, который специфичен для вируса гепатита С. Либо же концентрация РНК инфекции-возбудителя в данном образце была ниже границы чувствительности теста.

В острой фазе РНК вируса гепатита С такие качественные исследования по методике ПЦР могут выявить уже спустя 1–2 недели непосредственно после инфицирования организма, то есть задолго до появления антител к самому гепатиту.

Недостоверные результаты анализов такого исследования могут быть получены при:

• загрязненном биоматериале;
• присутствии в крови пациента гепарина;
• наличии в образце химических или белковых субстанций (ингибиторов), которые влияют на различные компоненты ПЦР.

Для проведения качественного анализа ПЦР специальной подготовки пациента к исследованию не требуется. В качестве материала используется венозная кровь.

Оценка результатов

Качественные тесты ПЦР имеют определенную степень чувствительности, и в зависимости от точности проведения исследований и уровня аппаратуры в лаборатории могут варьироваться в пределах от 10 до 500 МЕ/мл.

Это обозначает, что если вирус в пробе крови присутствует в очень малой концентрации (меньше порогового значения чувствительности данной лаборатории), то у больного пациента может быть определен результат как «не обнаружено». Из-за этого при проведении качественного анализа ПЦР с низким уровнем виремии (малой концентрацией вируса), к примеру, для больных, проходящих лечение противовирусной терапией, очень важно знать и порог чувствительности данной диагностической системы.

Варианты диагностических систем

Для контролирования вирусологического ответа, при проведении противовирусного лечения рекомендуется использовать диагностические системы с порогом чувствительности не меньше 50 МЕ/мл. Этим критериям соответствуют, к примеру: анализаторы Cobas Ampicolor ВГС-Теst (c точностью 50 МЕ/мл), а также РеалБест РНК ВГС (с чувствительностью 15 МЕ/мл).

Согласно рекомендациям ВОЗ, для установления окончательного диагноза гепатит С, необходимо основываться лишь на основании трехкратного обнаружения РНК вируса С в пробах сыворотки крови у больного, при отсутствии других разновидностей маркеров гепатита.

Кроме методов ПЦР для выявления у пациентов РНК ВГС также применяют исследование ТМА (метод транскрипционной амплификации). Он обладает лучшим порогом чувствительности (5–10 МЕ/мл), но в нашей стране такой метод тестирования пока не очень распространен.

Диапазон выявляемых модификаций вирусов

Такое качественное определении в сыворотке крови наличия РНК вируса гепатита С позволяет определять несколько генотипов этого вируса. В настоящее время науке известно более шести генотипов этого вируса, а также около 10 субтипов данного заболевания.

В нашей стране распространены вирусы 1, 2, 3 генотипов. Лаборатории могут выявлять следующие генотипы: 1а и 1в, 2а, 2в и 2с, а также 3, 4, 5а и 6 независимо от субтипов. Для всех модификаций вирусов специфичность определения составляет 100%.

Количественный анализ ПЦР

При помощи количественного теста ПЦР определяется уровень концентрации вируса гепатита в пробах крови (вирусная нагрузка). Данный тест на виремию (концентрацию вируса) позволяет определить количество единиц определенного генетического материала (самой вирусной РНК), которую выявляют в определенном объеме. В данном случае определяют его концентрацию в 1 мл, что соответствует 1 куб. см.

Количественные параметры анализа выражаются в цифрах, для этого используют как единицы измерения международные единицы (МЕ) на миллилитр (мл), обозначающийся как МЕ/мл. Сейчас в некоторых лабораториях количество вируса может определяться и в других единицах измерения: количестве копий на мл, обозначается как копии/мл.

• Сроки проведения.Для гепатита С такой количественный анализ ПЦР делают непосредственно перед началом проведения терапии. Затем на 1-й, 4-й, 12-й и 24-й неделях. Оценивание на 12-й неделе является показательным, оно позволяет определить эффективность проведения терапии.
• Подготовка к анализу. Для проведения количественного анализа ПЦР специальной подготовки пациента к исследованию не требуется. За полчаса до взятия проб не следует курить. В качестве лабораторного материала используется венозная кровь.

Оценка результатов

Для разных лабораторных тест-систем существуют разные коэффициенты перевода этого показателя в МЕ/мл. В среднем берут параметр пересчета, при котором 4 копии/мл=1 МЕ/мл. То есть к примеру, если лаборатория выдает результат анализа ПЦР 2,4*10⁶ копий/мл, то этот параметр нужно разделить на 4 и получим 6*10⁵ МЕ/мл.

Высокой считается уровень нагрузки в 800000 МЕ/мл, это примерно соответствует показателю в 3000000 копий/мл. Низкая виремия, согласно данным некоторых авторов, соответствует параметрам количественного ПЦР ниже 400000 МЕ/мл.

В результате проведения количественного теста могут быть поставлены окончательные результаты не в виде цифрового значения, а: «ниже диапазона измерений», или же «не обнаружено».

• Оценка: «ниже диапазона измерений». Это свидетельствует о том, что количественный тест не смог выявить вирусные РНК гепатита С, однако сам вирус в организме присутствует в очень малых концентрациях. Об этом говорит дополнительно проведенный качественный тест, подтверждающий сам факт присутствия вируса.
• Оценка: «не обнаружено». Такой результат свидетельствует, что количественный тест не обнаружил в пробе РНК вируса.

Параметр вирусной нагрузки, прежде всего, определяет степень инфекционности болезни, уровень «заразности» больного. Чем выше у пациента показатель концентрации вируса, тем больше вероятность риска передачи его другим людям. К примеру, при половых контактах с больным человеком, либо вертикальным путем. Такой количественный показатель также помогает определить эффективность проведения лечения больного.

Проведение количественного анализа ПЦК важно для противовирусной терапии, оценивания ее успешности и планирования сроков продолжительности курса. Так, при быстром ответе организма на лечение и низкой степени виремии, срок терапии может быть и сокращен.

При медленном снижении параметра количественного ПЦР противовирусную терапию следует продлить либо модифицировать. Если уровень вирусной нагрузки низкий, то это благоприятный фактор проведения терапии, если же повышенный, то применяемый метод лечение неэффективен и следует менять препараты или методы их использования.

Что такое анализ ПЦР?

ПЦР — метод молекулярного анализа, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителя уже на первой неделе после инфицирования с помощью полимеразной цепной реакции. Исследование обладает высокой специфичностью, точностью, и позволяет не только определить наличие или отсутствие вируса, но и его концентрацию и генотип.

Для исследования берут кровь пациента, в которой потенциально может находиться РНК вируса. В кровь добавляют праймеры — искусственно синтезированные участки искомого гена малой длины, и РНК-полимеразу — специальный фермент, который многократно увеличивает количество генетического материала возбудителя. С помощью специального аппарата проводят несколько циклов нагревания и охлаждения. Затем материал анализируют и сопоставляют с известными генами вируса, на основе чего делают заключение о наличии или отсутствии заражения.

Виды ПЦР-анализа на гепатит С

Различают три вида ПЦР-анализа:

1. Качественный анализ ПЦР. Первая стадия исследования. Он позволяет выявить генетический материал вируса в крови.
2. Количественный анализ ПЦР. Позволяет определить вирусную нагрузку — концентрацию генетического материала возбудителя в одном миллилитре крови. Это исследование проводят перед началом терапии, а затем на первой, четвертой, двенадцатой и (если курс длительный) двадцать четвертой неделе лечения, чтобы оценить его эффективность.
3. Генотипирование. Возбудитель гепатита С часто и быстро мутирует. На планете было обнаружено семь вариантов генотипа этого вируса. В России распространены первой, второй и третий тип. Каждый из генотипов обладает различной устойчивостью к терапии, например эффективность лечения первого типа составляет шестьдесят процентов, а для второго и третьего этот показатель достигает восьмидесяти пяти. Поэтому, для того чтобы подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения достаточной длительности необходимо точно определить, каким типом вируса заражен пациент.

Показания к ПЦР-анализу на гепатит С

ПЦР-исследование назначают в следующих случаях:

• контакт с больным человеком, при котором могло произойти заражение;
• положительный результат иммуноферментного анализа;
• признаки цирроза печени: изменение размеров печени, увеличение селезенки, появление на животе подкожного венозного сплетения;
• появление симптомов поражения печени: боли в правой части живота, пожелтение кожных покровов;
• повышение активности АЛТ и АСТ в биохимическом анализе крови;
• перед началом лечения для определения вирусной нагрузки;
• с целью контроля за эффективностью антивирусной терапии;
• после окончания лечения для контроля за рецидивами;
• при наличии диагностированного гепатита B, для исключения смешанного поражения печени.

Расшифровка ПЦР-исследования на гепатит С

Расшифровкой ПЦР-анализа и иммуноферментного анализа на гепатит С должен заниматься гепатолог или инфекционист. Анализировать результаты ПЦР необходимо в комплексе с данными биохимического анализа крови, биопсии и УЗИ. Только квалифицированный врач сможет проанализировать результаты исследований и, основываясь на них, назначить правильное лечение.

• Расшифровка качественного анализа.

• Расшифровка количественного анализа.

• Расшифровка генотипирования.

Возможна ситуация, когда ПЦР-анализ на гепатит С отрицательный, а иммуноферментный анализ распознает антитела против вируса. Это значит, что пациент переболел гепатитом С в острой форме и излечился самостоятельно. Примерно двадцать случаев инфицирования заканчиваются самопроизвольным излечением, если организм пациента оказывает достаточное сопротивление инфекции.

Несмотря на то, что ПЦР — высокоточный анализ, его результаты могут быть искажены в следующих ситуациях:

• кровь транспортировалась в лабораторию в ненадлежащих условиях, был нарушен температурный режим;
• образец биоматериала был загрязнен;
• в крови находились остаточные следы гепарина и других антикоагулянтов;
• в исследуемом веществе оказались ингибиторы — вещества, которые замедляют или останавливают полимеразную цепную реакцию.

Преимущества ПЦР перед другими методами

1. Диагностика на ранних стадиях. ПЦР обнаруживает генетический материал возбудителя заболевания. С помощью иммунофлюоресцентного анализа можно определить только иммуноглобулины — вещества, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию. В случае заражения гепатитом С промежуток между заражением и началом иммунного ответа может составлять несколько недель и месяцев, в это время ИФА будет неэффективна. ПЦР даст ответ уже на первой неделе после заражения.
2. Низкая вероятность ошибки. В исследуемом материале определяют участок генетического материала, который характерен только для одного вида возбудителей. Это позволяет исключить ложные результаты. При ИФА возможны ошибки, так как один и тот же вид антител может выделяться против разных вирусов — такие антитела называют перекрестными.
3. Высокая чувствительность. ПЦР позволяет обнаружить РНК возбудителя даже в минимальных количествах. Это дает возможность выявить скрытые инфекции.

Исследование для выявления возбудителя гепатита C (HCV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (РНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

РНК HCV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя. Для данного анализа линейный диапазон концентраций ДНК HCV, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5×10² – 1,0×10⁸копий/мл образца.

Синонимы русские

Вирус гепатита С (ВГС), количественное определение РНК.

Синонимы   английские

Hepatitis C Virus RNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood, HCV Viral Load, Hepatitis C Virus RNA Quant.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (HCV) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает печень. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания. HCV благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятно заражение при половом контакте и ребенка от матери во время родов, но это случается нечасто.

Острый вирусный гепатит, как правило, характеризуется бессимптомным течением и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро – с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса (редко сопровождается желтухой). У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов и скудным проявлением симптомов. У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Выявление РНК HCV свидетельствует о размножении вируса в организме и является методом диагностики заболевания. Генетический материал вируса можно обнаружить с помощью ПЦР через 10-12 дней после инфицирования – в этот период специфические антитела, которые образуются через несколько месяцев после заражения, отсутствуют и биохимические показатели функции печени находятся в пределах референсных значений.

Посредством ПЦР выявляют РНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита С и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки с учетом генотипа HCV позволяет контролировать проводимую терапию и прогнозировать течение болезни.

Эффективность лечения оценивается по количеству РНК до и во время терапии. Обычно вирусная нагрузка крови снижается в несколько раз за первые три месяца успешного лечения. При эффективной терапии виремия уменьшается на два порядка в первые 4-12 недель лечения и после окончания курса терапии генетический материал вируса в крови не обнаруживается. Отсутствие снижения виремии через 12 недель с начала лечения указывает на его неэффективность. Рекомендовано проводить анализ до начала терапии, на 4-й, 12-й и 24-й неделях лечения и через 24 недели после окончания курса. Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.

Для чего используется исследование?

• Для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С».
• Для прогнозирования течения вирусного гепатита С.
• Для мониторинга противовирусной терапии и решения вопроса о дальнейшей тактике лечения.

Когда назначается исследование?

• При качественном обнаружении РНК вируса гепатита С.
• При остром и хроническом вирусном гепатите С.
• При микст-гепатитах.
• При планировании, во время и после окончания противовирусной терапии.

Что означают результаты?

• Не обнаружено – РНК вируса гепатита С не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (200 копий/мл = 400 МЕ/мл).
• < 7,5*10^2 копий/мл (<1.5*10^3 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена в концентрации ниже линейного диапазона концентраций.
• < 2*10^6 копий/мл (< 4*10^6 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена. Низкая виремия (наиболее благоприятный прогноз течения заболевания и эффективности терапии).
• > 2*10^6  копий/мл (>4*10^6 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена. Высокая виремия.
• >1,0*10^8 копий/мл (>2*10^8 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена в концентрации выше линейного диапазона концентраций.

Линейный диапазон концентраций РНК вируса гепатита С, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5*10^2 – 1,0*10^8 копий/мл (1,5*10^3 – 2*10^8 МЕ/мл).

Что может влиять на результат?

Недостоверный результат может быть получен при:

• загрязнении биоматериала;
• наличии в образце ингибиторов – химических и белковых субстанций, влияющих на различные компоненты ПЦР;
• присутствии в крови гепарина.

Важные замечания

• Уровень вирусной нагрузки крови не указывает на степень повреждения печени и тяжесть заболевания. Для их оценки необходимо исследовать биохимические показатели и материалы биопсии.
• При планировании лечения очень важно определить генотип вируса гепатита С.

Также рекомендуется

• Anti-HCV, антитела, ИФА
• Аnti-HCV, антитела
• Антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита
• HCV, РНК [реал-тайм ПЦР]
• HCV, генотипирование, РНК [реал-тайм ПЦР]
• Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
• Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
• Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
• Фосфатаза щелочная общая
• Альбумин в сыворотке
• Билирубин общий
• Холестерол общий
• Тромбиновое время
• Фибриноген
• Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
• Лейкоцитарная формула
• Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гепатолог.

Литература

• Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. — К.: Здоровье, 2000. – Т.1.: 600-690.
• Кишкун А.А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. — М.:ООО МИА, 2006. – 471-476 с.
• Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16^th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.

• Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, and others. In vivo tropism of hepatitis C virus genomic sequences in hematopoietic cells: influence of viral load, viral genotype, and cell phenotype. Blood. 1998 May 15;91(10):3841-9.PMID:9573022.
• Revie D, Salahuddin SZ. Human cell types important for hepatitis C virus replication in vivo and in vitro: old assertions and current evidence. Virol J. 2011 Jul 11;8:346. doi: 10.1186/1743-422X-8-346. PMID:21745397.